Tipo: | Reagente para DIV |
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certificados: | iso13485/ce/cfda |
princípio: | pcr de fluorescência |
amostra: | sangue/pus |
formulário: | copo |
nome da marca: | singclean / outra marca |
Fornecedores com licênças comerciais verificadas
[Utilização prevista]
O kit de detecção de ácido nucleico de vírus Monkeypox (PCR de fluorescência) é utilizado para a detecção de ácido nucleico a partir de vírus monkeypox em amostras de erupções pustulares ou vesiculares humanas de indivíduos suspeitos de infecção por vírus monkeypox. Ao detectar especificamente os fragmentos de ácido nucleico do vírus monkeypox, o vírus monkeypox pode ser rapidamente identificado, o que é adequado para o diagnóstico rápido de doenças relacionadas causadas pela infecção do vírus monkeypox.
[Especificação da embalagem]
25 teste/caixa, 50 testes/caixa
NO | Componentes | 25testes/kit | 50testes/kit | Componentes principais |
1 | MMPV-PCR detection Mix | 950μL/tubo, 1 tubo | 950μL/tubo, 2 tubos | Primários, sondas, dNTPs, tampão PCR, etc. |
2 | Mistura de enzima MPV | 50μl/tubo, 1 tubo | 100μl/tubo, 1 tubo | H-Taq, UNG |
3 | MPV - produto de controlo positivo | 500μL/tubo, 1 tubo | 500μL/tubo, 1 tubo | Plasmids de clonagem para fragmentos de Gene alvo |
4 | MPV - produto de controlo negativo | 500μL/tubo, 1 tubo | 500μL/tubo, 1 tubo | Solução salina esterilizada |
Nota:
1. Os kits com números de lote diferentes não são intercambiáveis.
2. Todas as amostras biológicas do kit foram extintas.
[Requisito de amostra]
1. Tipo de amostra
Amostras de erupções plasmáticas e pustulares humanas ou vesiculares.
2. Colheita de amostras
Soro: Utilizar uma seringa estéril para colher 2 ml de sangue venoso dos indivíduos, injectá-la num tubo de colheita esterilizado, deixá-la à temperatura ambiente durante um período máximo de 4 horas e aguardar que a amostra separe o soro, Ou centrifugar a 4000 rpm durante 5 minutos à temperatura ambiente para separar o soro e transferi-lo para uma colheita de amostras de tubos de centrífuga estéreis sobressalentes de 1,5 ml de vesículas e pústulas: Selecione vesículas ou pústulas frescas na pele, desinfete-as com iodóforo e, em seguida, limpe o iodóforo com álcool a 70%. Depois de o álcool ter evaporado completamente, utilize uma agulha estéril para perfurar e espremer o líquido de tecido, mergulhar o cotonete no líquido, colocar rapidamente o cotonete no tubo de colheita de amostras de 3-5 ml que contém a solução de conservação, partir o cotonete perto da parte superior, aperte a tampa do tubo e vede-a para inspecção.
3. Armazenamento e envio de amostras
As amostras colhidas devem ser enviadas para teste imediatamente. As amostras devem ser testadas no prazo de 24 horas se conservadas entre 2ºC e 8ºC. As amostras que não possam ser testadas no prazo de 24 horas devem ser conservadas a -70 C ou menos (na ausência de condições de conservação de -70ºC, as amostras podem ser conservadas a -25ºC a -15ºC durante 10 dias). Devem ser evitados ciclos múltiplos de congelamento/descongelação. As amostras devem ser transportadas com gelo num jarro congelado selado ou numa caixa de espuma selada com gelo.
[Método de teste]
Leia as instruções do kit de teste antes de o utilizar.
1. Preparação do reagente (na área de preparação do reagente)
1.1 retire os componentes da caixa e coloque-os à temperatura ambiente. Depois de a temperatura estar equilibrada à temperatura ambiente, misturar bem e centrifugar por breves instantes para uma utilização posterior. De acordo com o número de amostras a testar, controlos negativos e controlos positivos, recolher a quantidade correspondente de componentes em proporção (38μL/pessoa da solução de reacção MPV-PCR 2μL/pessoa da mistura de enzimas MPV) e misturá-los cuidadosamente para formar uma mistura de PCR. Líquido-1, que foi utilizado após centrifugação instantânea.
1.2 Transferir os reagentes acima preparados para a área de processamento de amostras a utilizar.
2. Processamento de amostras (na área de processamento de amostras)
2.1 extração de amostras:
Deve ser utilizado um kit de extracção de ácido nucleico para a extracção de amostras.
O controlo negativo, o controlo positivo e as amostras a testar são processados simultaneamente.
2.2 Adicionar amostra
Adicionar 10μL de DNA extraído aos tubos de PCR na seguinte ordem: Controle negativo de MPV, controle positivo de MPV e amostra a ser testada. Adicione 40μl de MVP master mix a cada poço. Cada poço foi tampado, centrifugado a 2000 rpm por 10 segundos e colocado em uma máquina de PCR fluorescente.
3. Amplificação PCR (na área de amplificação e análise)
Consulte o manual de instruções de cada instrumento para obter as definições.
3.1 colocar os tubos de reacção PCR que tenham acabado de adicionar amostras ao instrumento de PCR de fluorescência, colocar os orifícios de teste de acordo com a sequência correspondente de adição de amostras, colocar os orifícios de teste para produtos de controlo de qualidade positivo, produtos de controlo de qualidade negativo e amostras desconhecidas e definir o nome da amostra.
3.2 sistema de reacção total: 25μL
3.3 seleção de canal de detecção de fluorescência: 1) Selecione o canal FAM (Reporter: FAM, Quencher: None) para detectar genes alvo do vírus monkeypox: 2) Selecione o canal HEX ou VIC (Reporter: HEX/VIC, Quencher: None); 3) defina a fluorescência de referência (Passive Reference) para None (nenhum); defina o volume da amostra para 50.
3.4 parâmetro cíclico:
Nota: Utilize o instrumento de PCR quantitativa de fluorescência ABI 7500 Rea-Time e escolha "None" (nenhum) em referência passiva e quencher.
4. Análise dos resultados
Após a reação, os resultados serão automaticamente guardados e a linha de base e o limiar de cada canal de deteção serão ajustados de acordo com as imagens analisadas. Clique em "Analysis" (análise) para efectuar a análise para que todos os parâmetros cumpram os requisitos de controlo de qualidade e, em seguida, verifique os resultados de detecção de cada amostra desconhecida.
5. Controlo de qualidade
Produtos de controlo negativo: A curva FAM não tem valor de TAC ou TAC > 40; e a detecção interna de padrão do vírus monkeypox (HEX/VIC) não tem valor de TAC ou TAC > 40.
Produtos de controlo positivo: FAM curve CS35; e monkeypox virus internal standard detection (HEX/VIC) is positive, CT ≤ 35.
se os dois itens acima forem cumpridos ao mesmo tempo na mesma inspecção, caso contrário, a segunda inspecção será considerada inválida e será necessária uma nova inspecção.
[Valor de referência positivo]
Através do estudo dos valores de referência, determinou-se que o valor de referência da TC do gene alvo detectado por este kit era de 40, e o valor de referência da TC do padrão interno era de 40.
[Interpretação dos resultados do teste]
1. Valor de TC de detecção FAM ≤ 40 e detecção interna padrão positiva (valor de TC ≤ 40), reportado como positivo ao vírus monkeypox;
2. Nenhum valor de TC ou valor de TC > 40 na detecção de FAM e a detecção interna padrão do canal for positiva (valor de TC ≤ 40) e o relatório for negativo para o vírus monkeypox;
3.lf não existe valor de TAC ou valor de TAC > 40 no teste padrão interno, o resultado do teste da amostra é inválido. A causa deve ser encontrada e eliminada, e a amostra deve ser novamente amostrada e testada (se o resultado do teste repetido ainda for inválido, contacte a empresa).
4. Para as amostras positivas, o resultado do teste padrão interno não é necessário; para as amostras negativas, o teste padrão interno deve ser positivo. se o teste padrão interno for negativo, o resultado do teste da amostra é inválido. As amostras são reamostradas e são efectuadas experiências repetidas (se os resultados dos testes de experiências repetidas continuarem inválidos, contacte a nossa empresa).
[Valor de referência positivo]
Através do estudo dos valores de referência, determinou-se que o valor de referência da TC do gene alvo detectado por este kit era de 40, e o valor de referência da TC do padrão interno era de 40.
[Interpretação dos resultados do teste]
1. Valor de TC de detecção FAM ≤ 40 e detecção interna padrão positiva (valor de TC ≤ 40), reportado como positivo ao vírus monkeypox;
2. Nenhum valor de TC ou valor de TC > 40 na detecção de FAM e a detecção interna padrão do canal for positiva (valor de TC ≤ 40) e o relatório for negativo para o vírus monkeypox;
3.lf não existe valor de TAC ou valor de TAC > 40 no teste padrão interno, o resultado do teste da amostra é inválido. A causa deve ser encontrada e eliminada, e a amostra deve ser novamente amostrada e testada (se o resultado do teste repetido ainda for inválido, contacte a empresa).
4. Para as amostras positivas, o resultado do teste padrão interno não é necessário; para as amostras negativas, o teste padrão interno deve ser positivo. se o teste padrão interno for negativo, o resultado do teste da amostra é inválido. As amostras são reamostradas e são efectuadas experiências repetidas (se os resultados dos testes de experiências repetidas continuarem inválidos, contacte a nossa empresa).
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